Práctica 3. Extracción de ADN bucal 22/10/2018

• En esta práctica realizamos una extracción de ADN bucal mediante una técnica casera, cuyo objetivo es obtener un lisado de células homogéneo donde los ácidos nucleicos aparezcan libres de las estructuras celulares que los protegen.
• Se usa una solución de cloruro sódico que modificará las concentraciones del medio para conseguir que la célula explote. Además, se usan detergentes (solución jabonosa) que ayuda a destruir la bicapa lipídica. Todo esto provoca la lisis de la membrana celular y nuclear, liberando su contenido.
• Por último, se añade alcohol para observar las proteínas insolubles en él como una hebra de ADN visible a simple vista. 

MATERIALES

Pipeta graduada de 10 ml

Pipeta graduada de 2 ml

Prepipeta (10 ml)

Prepipeta (2 ml)

Pipetas Pasteur

Tubos de ensayo con tapón

Vaso de precipitado

Varilla agitadora

Escobillón o hisopo

Gradilla

Baño de agua

REACTIVOS

Agua embotellada

Alcohol etílico 96 º

NaCl

Solución jabonosa

CÁLCULOS

En primer lugar, realizamos los cálculos adecuados y preparamos los reactivos necesarios. Para esta práctica, debemos preparar una solución de NaCl al 8% y una solución jabonosa al 30%.
Para preparar estas soluciones, utilizamos vasos de precipitado, pipetas graduadas, prepipetas, varilla agitadora, cloruro sódico y solución jabonosa.

Solución de NaCl al 8%

Utilizamos el peso del laboratorio para calcular la masa necesaria de NaCl (0.8 gramos). Introducimos dicha cantidad en un vaso de precipitado y añadimos agua hasta alcanzar una solución de 10 ml. Finalmente, usamos la varilla agitadora hasta conseguir que el cloruro sódico se disuelva completamente.

Solución jabonosa al 30%

Con la ayuda de una pipeta y una prepipeta, introducimos 3 ml de solución jabonosa en un vaso de precipitado. A continuación, añadimos agua hasta alcanzar una solución de 10 ml y usamos la varilla agitadora.

PROCEDIMIENTO

1. Sacamos el escobillón del tubo precintado y raspamos con movimientos arriba-abajo por las paredes de las mejillas durante 1 minuto y lo volvemos a introducir en el tubo. El objetivo de este paso es desprender las células de las que obtendremos el ADN bucal.
   
2. Depositamos en un vaso de precipitado 10 ml de agua embotellada.
3. Nos enjuagamos la boca con ese agua durante 1-2 minutos.
4. Depositamos nuevamente el agua en el vaso.
5. Volvemos a sacar el escobillón del tubo y lo utilizamos para remover el agua depositada en el vaso.
   
6. Trasvasamos 5 ml de la mezcla anterior en un tubo de ensayo.
   
7. Añadimos 1 ml de la solución de NaCl y mezclamos suavemente.
8. Dejamos reposar durante 1 minuto.
9. Añadimos 1 ml de la solución jabonosa y mezclamos suavemente.
10. Dejamos reposar durante 1 minuto.
11. Añadimos 5 ml de alcohol etílico (96º) dejando deslizar suavemente por la pared del tubo colocado en posición inclinada.

1. Nota: Es muy importante que en este paso no se mezclen los líquidos, el alcohol debe quedar en la parte superior.

   

12. Incubar durante 5-10 minutos.
    
    
    
    
13. Observamos en el tubo de ensayo que los filamentos de ADN han subido a la superficie en la fase acuosa, pudiendo ser observados a simple vista.
    
14. Tras finalizar la práctica, es imprescindible realizar una correcta limpieza del material utilizado y desechar los residuos.

ACTIVIDADES

1. ¿Para qué se añade solución jabonosa?
1.  Se añade solución jabonosa porque ayuda a destruir la bicapa lipídica, tanto la de la membrana celular como la de la membrana nuclear. También ayuda a desnaturalizar las proteínas.

1. ¿Por qué las fibras de ADN quedan la capa alcohólica?
1.  En la capa alcohólica podemos observar las fibras de ADN porque las proteínas son insolubles en el alcohol.

1. Las fibras de ADN que obtenemos ¿están purificadas? Razona tu respuesta. 
1.   Las fibras de ADN que obtenemos no están purificadas porque tiene proteínas unidas a él, y por eso podemos verlo.