Práctica 2. Pipeteo de microvolúmenes 08/10/2018

MATERIALES Y REACTIVOS

Colorante I (rojo) y colorante II (azul)

Gradilla con múltiples pocillos

Micropipeta

Puntas desechables para micropipetas

Bote rechazo para puntas de pipetas

Esta práctica consta de dos ejercicios:

EJERCICIO 1

• Antes de comenzar el ejercicio, es importante tener en cuenta una serie de factores para realizar el pipeteo correctamente.
•  Cogemos la punta desde la gradilla sin tocarla con la mano.
• Pipetear siempre a la altura de los ojos.
• Introducir el extremo de la punta con el émbolo apretado hasta el primer tope para evitar la formación de burbujas.
• Para expulsar el contenido, se debe apretar el émbolo de la micropipeta hasta el segundo tope.
• Expulsamos la punta sin tocarla con la mano.

Este primer ejercicio lo realizamos en la parte superior de la gradilla, utilizando 16 pocillos.

1.  Pipetamos 40 μL del tubo de colorante I (rojo) en el primer pocillo. Para ello, cogemos una punta desechable con ayuda de la micropipeta.

   

   Micropipeta y punta desechable

   

   Primer pocillo con 40 μL

2.  De los 40 μL pipeteados en el primer pocillo, pipeteamos 20 μL al segundo pocillo.

1. Nota: Es importante tener en cuenta el orden en el que vamos a utilizar los pocillos. En este ejercicio deberíamos seguir un orden de arriba a abajo, aunque yo seguí un orden de izquierda a derecha. 

   

   Primer pocillo con 20 μL y segundo pocillo con 20 μL

    
3. Del segundo pocillo pipeteamos 10  μL al tercer pocillo. 

   

    Primer pocillo con 20 μL, segundo pocillo con 10 μL y tercer pocillo con 10 μL 
   
   

4. Del primer pocillo pipeteamos 10 μL al cuarto pocillo. Hemos conseguido tener 10 μL en cada uno de los cuatro pocillos.

   

   Tenemos 10 μL en cada uno de los cuatro pocillos

5. Repetimos el ejercicio en las otras 3 filas para conseguir un manejo correcto de la micropipeta.

   

   Repetimos en la segunda fila

   

   Terminamos de pipetear en las cuatro filas

    
6.  Tras finalizar el pipeteo del colorante I en los 16 pocillos, pipeteamos una cantidad de agua previamente acordada en cada una de las filas. Para ello, expulsamos la punta utilizada introduciéndola en el bote de rechazo y volvemos a coger una punta nueva. En la primera fila pipeteamos 20 μL; en la segunda, 30 μL; en la tercera, 40 μL y, finalmente, pipeteamos 50 μL de agua en la cuarta fila.

   

   Pocillos con colorante I y agua para apreciar la diferencia de color

   
   

   
   

   
   

7.  Finalmente, desechamos la punta utilizada en el bote de rechazo.

   

   Firma de la profesora

   EJERCICIO 2

   Este segundo ejercicio lo realizamos en la parte inferior de la gradilla, utilizando 16 pocillos.
   
   
   
   1.  Pipetamos 80 μL del tubo de colorante II (azul) en el primer pocillo.
   2. De los 80 μL pipeteados en el primer pocillo, pipeteamos 40 μL al segundo pocillo.

   1. Nota: Es importante tener en cuenta el orden en el que vamos a utilizar los pocillos. En este ejercicio deberíamos seguir un orden de arriba a abajo, pero yo seguí un orden de izquierda a derecha.

      

      Primer pocillo con 40 μL (colorante II) y segundo pocillo con 40 μL (colorante II)

       
   3. Pipeteamos 20 μL del primer pocillo y los introducimos en el tercer pocillo.

      

      Primer pocillo con 20 μL, segundo pocillo con 40 μL y tercer pocillo con 20 μL

   4. Pipeteamos 20 μL del primer pocillo y los introducimos en el cuarto pocillo. Tras realizar este paso, tenemos 0 μL en el primer pocillo, 40 μL en el segundo pocillo, 20 μL en el tercer pocillo y 20 μL en el cuarto.
   5. Pipeteamos 20 μL del segundo pocillo y los introducimos en el cuarto pocillo. 

      

      Primer pocillo con 0 μL, segundo pocillo con 20 μL, tercer pocillo con 20 μL y cuarto pocillo con 40 μL

   6. Repetimos el ejercicio en las otras 3 filas para conseguir un manejo correcto de la micropipeta. 
      
   7.  Tras finalizar el pipeteo del colorante II en los 16 pocillos, pipeteamos una cantidad de agua previamente acordada en cada una de las filas. Para ello, expulsamos la punta utilizada introduciéndola en el bote de rechazo y volvemos a coger una punta nueva. En la primera fila pipeteamos 40 μL; en la segunda, 50 μL; en la tercera, 60 μL y, finalmente, pipeteamos 80 μL de agua en la cuarta fila.

      

      Pocillos con colorante II y agua para apreciar la diferencia de color

   8.  Finalmente, desechamos la punta desechable utilizada en el bote de rechazo y es imprescindible realizar una correcta limpieza del material utilizado.
       

   9. 

      Firma de la profesora

      ACTIVIDADES

      1.  ¿Por qué es importante introducir la punta en el líquido con el primer tope del émbolo apretado? ¿Por qué es importante sacar la punta del líquido con el segundo tope émbolo apretado? ¿Afectaría a la práctica el no hacerlo de esta forma?
      1. Es importante introducir la punta en el líquido con el primer tope del émbolo apretado para evitar la formación de burbujas y la succión de un volumen distinto del deseado.
      2. Es importante sacar la punta del líquido con el segundo tope del émbolo apretado para expulsar completamente el volumen y evitar la succión del volumen expulsado.
      3. Si no lo hacemos de esta forma, afectaría a la práctica ya que los volúmenes pipeteados no serían los correctos y no podríamos realizar el ejercicio.
      1. ¿Cómo son los volúmenes finales de los pocillos en el primer ejercicio en cada fila?
      1. En el primer pocillo tenemos 10 μL de colorante rojo y 20 μL de agua; en el segundo tenemos 10 μL de colorante rojo y 30 μL de agua; en el tercero tenemos 10 μL de colorante rojo y 40 μL de agua; en el cuarto pocillo tenemos 10 μL de colorante rojo y 50 μL de agua. Los volúmenes finales son: 30 μL en el primero, 40 μL en el segundo, 50 μL en el tercero y 60 μL en el último pocillo.
      1. ¿Qué volumen tiene el primer pocillo del segundo ejercicio al finalizar la práctica? ¿Qué significa? ¿Se ha pipeteado inicialmente la cantidad necesaria para hacer el ejercicio?
      1.  El primer pocillo tiene 0 μL al finalizar el ejercicio 2. Al comenzar el ejercicio pipeteamos en ese primer pocillo 80 μL, pero al pipetear de ese primer pocillo en los demás, ha quedado con 0 μL. Era la cantidad necesaria para repartirla en los demás pocillos.
       
      1. ¿Qué volumen final tiene el cuarto pocillo del segundo ejercicio respecto al tercero? ¿A simple vista habrías asegurado lo mismo? Explica el por qué de este efecto visual.
      1. El cuarto pocillo tiene 20 μL más que el tercero. A simple vista no habría asegurado lo mismo debido al efecto visual que presenta. Este efecto se debe a que trabajamos con volúmenes muy pequeños (μL), y a simple vista es muy difícil realizar una medición.
       
      
      1. ¿Qué efecto tendría utilizar una pipeta mal calibrada en la realización de esta práctica?
      1. Si utilizáramos una pipeta mal calibrada no podríamos pipetear los volúmenes deseados, estos serían incorrectos y no podríamos realizar correctamente los ejercicios en la gradilla con múltiples pocillos.